Descrição:
O Anti-Jo-1 é um ensaio imunoenzimático de fase sólida indireta (ELISA).É designado para determinação quantitativa de anticorpos da classe IgG dirigida contra antígenos nucleares extraíveis Jo-1.
Os ensaios são baseados em microplacas cobertas com antígenos altamente purificados. Elas podem ser divididas em 12 tiras de 8 poços cada .
Apresentação:96
Metodologia: ELISA
Categoria: PAINEL REUMATOLOGICO
Registro no MS: 80213250074
As doenças autoimunes reumatóides estão freqüentemente associadas com a ocorrência de anticorpos contra vários antígenos nucleares ou citoplasmáticos. Estes são chamados de antígenos anti-nucleares (ANA) e podem ser divididos em três grupos:
1. Antígenos anti nuclear verdadeiro (ANA): dsDNA, ssDNA, histonas, DNP e RNA (do núcleo)
2. Antígenos nucleares extraível: Sm (Smith), n-RNP, Scl 70 e PM-1
3. Antígenos citoplasmáticos SS-A (Ro*), SS-B (La*) estão localizados no citoplasma e nos núcleos.
Em pacientes com anticorpos da Síndrome de Sjögren contra SS-A e SS-B freqüentemente ocorre em combinação.
Devido a forte associação dos anticorpos SS-A e SS-B aos fenótipos HLA-DR3 e DR2 uma pré disposição genética é suspeita. A proteína anti SS-A atravessa a placenta e pode causar o desenvolvimento de SLE em recém nascidos
Proteínas imunoreativas podem ocorrer em várias combinações e liga também as proteínas hospedeiras de origem viral. Elas induzem a síntese de anticorpos policlonal, das classes IgG, IgM e IgA. É indicado especialmente quando houver doenças do tecido conjuntivo relacionada com infecções virais pelo EBV (Vírus Epstein-Barr).
Cada classe de imunoglobulina causa um padrão de imunofluorescência especifico.
Basicamente a titulação de imunofluorescência correlaciona com a quantificação de anticorpo IgG mas as concentrações podem variar consideravelmente entre cada titulação.
A quantificação de anticorpos da classe IgG extensivamente correlaciona com a atividade das doenças. Isto torna superior a imunofluorescência utilizando células HEP-2. A IF com Critidia lucillae as vezes resultam em desvio de valores.
Hoje os melhores antígenos imunoreativos investigados são os em dupla cadeia de DNA (ds DNA) O DNA de cadeia simples (ss DNA), Sm (Smith), Sn-RNP (partículas pequenas de ribonucleoproteínas), um complexo RNP/Sm que é estabilizado por ácido ribonucléico assim como SS-A (Ro) e SS-B (La). O antígeno Scl 70, uma proteína com peso molecular 70kD está associada com escleroderma.
Nas doenças autoimune reumatóides podem ser encontrados vários perfis dos autoanticorpos para estes antígenos. Em uma alta incidência, eles estão relacionados a Lupus eritromatoso sistêmico ativo e inativo, doença mista do tecido conjuntivo (Síndrome de Sharp), artrites reumatóides, Síndrome Sjögren, escleroderma, dermatite fotosensitiva e Lupus induzido por drogas.
Em pacientes com Lupus, anticorpos anti ds DNA típicos podem ser detectados. Pacientes sem estes anticorpos freqüentemente apresentam anticorpos anti ss DNA e anti SS-A e anti SS-B. Uma forte correlação entre concentração de anticorpo e severidade da doença foi observada com concentrações deanticorpos elevadas em fases ativas da doença. Portanto a quantificação é mais informativa comparada a simples titulação de imunofluorescência. A quantificação de anti ss DNA fornece informações adicionais em relação a especificidade e atividade do anticorpo. Exceto em anticorpos anti ss DNA de processos antinflamatório crônicos são encontrados em pacientes saudáveis.
A maioria destes parâmetros não são específicos para uma enfermidade mas eles ocorrem em várias combinações. O padrão de combinação de anticorpos diferentes e sua concentração juntamente com o quadro clínico geral do paciente são instrumentos de diagnóstico úteis na avaliação de enfermidades autoimune reumatóides.
Referência:
NEGATIVO: < 15 U/ML
DUVIDOSO: > 15 E < 25 U/ML
POSITIVO: > 25 U/ML
Procedimentos:
Dilua todas as amostras do paciente 1:100 com diluente de amostra antes do ensaio. Então combine 10ml de amostra com 1000ml de diluente de amostra em um tubo de poliestireno. Misture bem. Calibradores e controles estão prontos para uso e não é necessário diluir.
1- Prepare um número suficiente de tiras da microplacas para acomodar calibradores, controles e amostras do paciente em duplicata.
2- Pipetar 100ml de calibradores, controles e amostras do paciente pré diluída nos poços.
3- Incubar por 30 minutos à temperatura ambiente (18 – 30°C).
4- Descartar os conteúdos dos micropoços e lavar 3 vezes com 300ml de solução de lavagem
5- Dispense 100ml de enzima conjugada em cada poço.
6- Incube por 15 minutos à temperatura ambiente
7- Descartar os conteúdos dos micropoços e lavar 3 vezes com 300ml de solução de lavagem
8- Dispense 100ml de solução de substrato TMB em cada poço
9- Incube por 15 minutos à temperatura ambiente
10- Adicione 100ml de solução de parada em cada poço dos tiras e deixe descansar por 5 minutos
11- Leia a densidade óptica à 450nm e calcule os resultados. A quantificação bi-cromática com referência à 600-650nm é recomendada.
Vantagens:
Metodologia padronizada permite a realização do painel com apenas uma diluição de amostra.Sensibilidade e especificidade
Pontos Fortes:
Painel completo.Rapidez,facilidade de execução.Facilmente automatizável em equipamentos Personal lab e Labotech
País: ALEMANHA
