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CLOSTRIDIUM PERFRINGES ENTEROTOXINA - R-BIOPHARM



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Descrição:
Para diagnóstico in vitro. O RIDASCREEN® Clostridium perfringens Enterotoxin é um ensaio imunoenzimático para a detecção qualitativa da enterotoxina Clostridium perfringens nas amostras de fezes.

Vantagens:
Método ELISA
Reagentes prontos para uso
Fácil procedimento técnico

Apresentação:96

Metodologia: ELISA

Grupo: TOXINAS

Categoria: PESQUISA DE ANTIGENOS

Registro no MS: 80213250160

Clostridium perfringens é uma bactéria anaeróbica, formadora de esporos e gram-positiva, que normalmente é encontrada na flora do intestino grosso dos humanos. Ela se diferencia das outras clostridias pela falta de flagelos perítricos. Há 5 tipos de Clostridium perfringens (A - E). Enquanto que, para os humanos, são importantes principalmente o tipo A e, sob certas condições (dieta, deficiência de tripsina), o tipo C, que causa a enterite necrótica, nos animais encontram-se todos os tipos.

A divisão nestes grupos é relacionada com a capacidade de formação das toxinas principais (toxina alfa, beta, epsilon e iota), e todas têm um efeito citotóxico e necrotizante. Além destas quatro toxinas principais, os grupos de C. perfringens produzem uma série de outras toxinas, das quais a enterotoxina, um grande polipéptido de 35-kDa, tem importância patogênica para os humanos.

Uma intoxicação alimentar causada por esta enterotoxina de C. perfringens (CPE) é conhecida por mais tempo do que os outros problemas de saúde. Com a ingestão de alimentos conservados de maneira imprópria, principalmente alimentos que já foram esquentados uma vez, grandes quantidades de C. perfringens são absorvidas. Esta, em consequência, formam grandes quantidades de toxinas e causam problemas intestinais acompanhados de diarréia e cólicas abdominais.

Os sintomas aparecem aprox. de 8 e 24 horas após a ingestão dos alimentos contaminados e desaparecem após outras 24 horas. Vômito, febre e dores de cabeça são sintomas paralelos raros. Além da intoxicação alimentar causada pela CPE, nos últimos anos está aumentado a ocorrência de uma diarréia associada a antibióticos (DAA) causada pela C. perfringens em aprox. 10 % de todos os casos, bem como 5 a 20 % dos casos de diarréias ocasionais (SPOR), que não são causadas por uma intoxicação alimentar.

Esta forma de doença diarréica até à colite pseudomembranosa (CPM) é bem mais grave e dura mais tempo (10 a 30 dias), sendo que a ocorrência de sangue e catarros nas fezes é mais frequente. No caso da observação do corte do intestino grosso e do reto, observa-se áreas edematosas, que se originam da das lesões causadas pela CPE.

Exames mais recentes demonstraram que a enterotoxina pode ser codificada tanto cromossomicamente como de forma episomal, mas que contém respectivamente a mesma sequência de aminoácidos. Além disso, descobriu-se que nas intoxicações alimentares os isolados encontrados sempre formam CPE codificado cromossomicamente, enquanto os isolados de pacientes com DAA ou SPOR forma CPE codificado plasmaticamente.

Com o teste RIDASCREEN® Clostridium perfringens Enterotoxin, existe a possibilidade, além do teste RIDASCREEN® Clostridium difficile Toxin A/B, de um outro importante sistema de detecção para o esclarecimento de doenças diarréicas esporádicas e associadas a antibióticos. Ele possibilita um diagnóstico rápido e seguro e, portanto, é auxiliar na decisão sobre a terapia.

Referência:

As amostras cujo valor de absorbância estiverem acima de 10% do valor cut-off são conideradas positivas.

As amostras cujo valor de absorbância etiverem entre 10% acima e abaixo do valor cut-off são consideradas indeterminadas.

As amostras cujo valor de absorbância etiverem entre 10% abaixo do valor cut-off
calculado devem ser consideradas negativas.

Procedimentos:
Preparo do tampão de lavagem:
Misturar uma parte do concentrado do tampão de lavagem (Wash) com 9 partes de água destilada.
Preparo das amostras:
Adicionar em um recipiente 1 ml de tampão de diluição de amostra (Diluent 3).
As fezes líquidas são pipetadas (aprox. 100 μl) e suspensas em um tampão.
No caso de fezes sólidas, uma quantidade equivalente de fezes (50 -100 mg) é retirada com uma espátula ou uma agulha metálica descartável e suspensa. Homogeneizar
Pipetar 2 gotas (100μl) do controle positivo (Control+), do tampão de diluição das amostras Diluent 3 (=controle negativo) ou da suspensão das amostras de fezes.
Pipetar 100 μl de conjugado (Conjugate)
Incubar por 60 minutos a temperatura ambiente (20 – 25 °C).
Lavar 5 vezes, cada vez com 300 μl de tampão de lavagem.
Pipetar 100 μl de substrato (Substrate).
Incubar a placa por 15 minutos a temperatura ambiente (20 –25 °C) no escuro.
Bloquear a reação com a adição de 50 μl de reagente bloqueador (Stop) em todas as cavidades.
Ler a absorbância a 450 nm (comprimento da onda de referência - 600nm).

País: ALEMANHA