Voltar

ANCA FORMALINA (70T) - IMMUNO CONCEPTS



Produtos



Descrição:
No teste de imunofluorescência para ANCA, vários padrões de coloração celular podem ser vistos. Dois padrões principais de coloração têm sido descritos e bem caracterizado quando os neutrófilos fixados com etanol são usados no teste de imunofluorescência para ANCA. Anticorpos que apresentam padrão granular citoplasmático, chamados de cANCA, são usualmente direcionados contra uma protease sérica, a Proteinase 3 (PR-3). Este anticorpo tem apresentado uma alta associação com granulomatose. O outro padrão de coloração, o perinuclear, ou padrão pANCA, que é usualmente devido a anticorpos direcionados contra mieloperoxidase (MPO), tem sido associado a vasculite sistêmica e glomerulonefrite crescente e necrótica idiopática (4). Se os neutrófilos são fixados com formol, mieloperoxidase (o principal antígeno responsável pelo padrão pANCA em células fixada com etanol) continua sendo associado aos grânulos primários (alfa), e apresenta uma distribuição granular citoplasmática. Proteinase-3 (PR-3) permanece associada com os grânulos primários (alfa) em tanto na fixação por etanol quanto na fixação por formol.

Vantagens:
Ótima qualidade do substrato. Lamina com 7 poços

Apresentação:70

Metodologia: IMUNOFLUORESCENCIA INDIRETA

Grupo: AUTOIMUNIDADE

Categoria: PAINEL DE VASCULITES

Registro no MS: 80213250001

Este é um método de ensaio por imunofluorescência indireta de  para a detecção semiquantitativa anticorpos antineutrófilos citoplasmáticos (ANCA), em soro humano.

Anticorpos antineutrófilos citoplasmáticos (ANCA) são um grupo de anticorpos que reagem com antígenos citoplasmáticos em neutrófilos humanos. Apesar destes anticorpos terem sido relatados originalmente em 1964, o primeiro relato correlacionando estes anticorpos com doenças foi em 1982, quando Davies et al relataram estes anticorpos em oito pacientes com glomerulonefrite necrótica segmentar.

Em 1984, quatro pacientes com vasculites e glomerulonefrite foram relatados. Em 1985, van der Woude et al, demonstraram que ANCA tem alta associação com granulomatose de Wegener, e que titulação de anticorpos correlaciona-se com a atividade da doença. Em 1988, Flak e Jennette relataram que ANCA tem especificidade para mais que um antígeno. Um relato subseqüente demonstrou que a especificidade do ANCA correlaciona-se com as características patológica da vasculite.

Referência:
Valores normais: Não reagente a uma diluição 1/20

Procedimentos:
Todas as amostras, reagentes (incluindo a solução de tampão de lavagem), e micropoços devem estar a temperatura ambiente antes de uso.
1.Reconstituição do Tampão de Lavagem: Dissolver o conteúdo de uma sache de tampão salino em pó em um litro de água deionizada ou destilada.
2.Diluição da Amostra do Paciente:
Screening: Diluir a amostra do paciente numa proporção de 1:20 através da adição de 0,05 mL (50mL) de soro a 0,95 mL (950mL) de PBS reconstituído.
Titulação semi-quantitava: Preparar uma série de diluições (p.ex. 1:40, 1:80,..)
3.Preparo das lâminas: Remover o número necessário de lâminas de suas embalagens e coloque o soro controle nos poços destinados aos controles . Adicionar 1 gota (20-25mL) de amostras de pacientes diluídas nos poços numerados.
4.Incubação Das lâminas (30±5 minutos a temperatura ambiente – 18 a 24o C):
5.Enxágüe com Tampão:
Remova a(s) lâmina(s) dos incubadores e lave brevemente com PBS usando uma piseta ou Pipeta Pasteur .
6.Lavagem Com o PBS:
Lave a(s) lamina(s) por 10 minutos com o Tampão PBS em cubas de lavagem ou na Jarra Coplin. Agitação suave é recomendada durante a imersão.
7.Reagente de Anticorpo Fluorescente (Cubra os poços com 10-12 gotas):
Remova uma lâmina de cada vez do tampão e mergulhe de 3-5 vezes na água destilada ou deionizada. Bate-los de lado contra papéis absorventes para remover o excesso de água. Retorne imediatamente à câmara de incubação e cubra os poços completamente usando o Reagente de Anticorpo Fluorescente.
8.Incubação das lâminas (30±5 minutos a temperatura ambiente – 18 a 24o C):
Coloque a(s) lâmina(s) em uma câmara úmida coberta.
9.Enxágüe com Tampão:
Remova a(s) lâmina(s) dos incubadores e lave brevemente com PBS usando uma piseta ou Pipeta Pasteur .
10.Lavagem Com o PBS:
Lave a(s) lamina(s) por 10 minutos com o Tampão PBS em cubas de lavagem ou na Jarra Coplin. Agitação suave é recomendada durante a imersão.
11.Montagem das Lamínulas:
Remova uma lâmina de cada vez do tampão e mergulhe de 3-5 vezes na água destilada ou deionizada. Bate-los de lado contra papéis absorventes para remover o excesso de água.
Adicionar 4-5 gotas de Meio de Montagem Semipermanente ao longo da linha média. Coloque cuidadosamente a lamínula na posição, evitando bolhas ar, através do abaixamento da lamínula de uma extremidade para outra.

País: ESTADOS UNIDOS