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ANA HEp - 2000 (280T) - IMMUNO CONCEPTS



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Autoimune


Descrição:
O teste ANA fluorescente da IC usa uma técnica de fluorescência indireta para anticorpos descrita inicialmente por Weller e Coons (32). Amostras de pacientes são incubadas com substrato antígeno que permite uma ligação específica com dos autoanticorpos com o núcleo da célula. Se os ANAs estiverem presentes, um complexo estável antígeno-anticorpos é formado. Após lavagem para remover os anticorpos não-específicos, o substrato é incubado com anticorpos anti-humanos conjugados com fluoresceina. Quando os resultados forem positivos, há formação de um complexo estável de três fases, que consistindo na ligação anticorpo fluorescente com o anticorpo antinuclear humano, o qual está ligado ao antígeno nuclear. Este complexo pode ser visualizado com a ajuda de um microscópio fluorescente. Em amostras positivas, os núcleos das células terão fluorescência cor verde-maçã com um padrão de coloração característico da distribuição particular do antígeno nuclear dentro das células. Se a amostra para ANA for negativo, os núcleos não apresentarão um padrão claramente distinguível de fluorescência.

Vantagens:
A grande vantagem deste produto em relação ao HEp-2 convencional é a capacidade de detectar todos os padroes convencionais mais o padrão específico anti SS-A.Isto é devido ao processo de transfecção celular

Apresentação:280

Metodologia: IMUNOFLUORESCENCIA INDIRETA

Grupo: AUTOIMUNIDADE

Categoria: PAINEL REUMATOLOGICO

Registro no MS: 80213250010

Este é um sistema de Imunofluorescência Indireta   para a detecção semiquantitativa de anticorpos antinucleares em soro humano. Este sistema usa células HEp-2 transfectadas, que permite uma identificação específica dos auto-anticorpos SS-A (Ro). Os auto-anticorpos para SS-A (Ro) podem apresentar um padrão de coloração distinto nas células transfectadas. Quando este padrão está presente, ele é considerado uma evidência confirmatória de que os anticorpos anti -SS-A (Ro) estão presentes.

Anticorpo antinuclear (ANA) é um termo geral usado para descrever auto-anticorpos contra várias proteínas nucleares de células. Estudos recentes destes anticorpos, usados em técnicas imunofluorescentes, revelaram um número seleto de proteínas nucleares específicas (1). Devido à alta correlação entre ANA positivo e lupus eritematoso sistêmico (SLE), para um ANA negativo é geralmente descartada a suspeita da doença.

As células HEp-2 neste sistema de teste foram transfectadas com múltiplas cópias de seqüência específica de DNA que carregam a informação para os antígenos SS-A (Ro). Aproximadamente 10-20% das células transfectadas hiper expressam  este antígeno, assim a detecção dos anticorpos para SS-A (Ro) é mais consistente que nas células que não foram transfectadas. Auto-anticorpos para SS-A (Ro) podem apresentar um padrão distinto de coloração nas células transfectadas.

Referência:
Valores normais: Negativo a uma diluição 1/80.

Procedimentos:
Todas as amostras, reagentes (incluindo a solução de tampão de lavagem), e micropoços devem estar a temperatura ambiente antes de uso.
1.Reconstituição do Tampão de Lavagem: Dissolver o conteúdo de uma bolsa de tampão salino em pó em um litro de água deionizada ou destilada.
2.Diluição da Amostra do Paciente:
Triagem: Diluir a amostra do paciente numa proporção de 1:40. Titulação semi quantitativa: Para fazer uma série de diluições dobradas (isto é, 1:80,1:160, 1:320,..., 1:2560), utilizando PBS.
Preparo das lâminas: Remover o número necessário de lâminas de suas embalagens e coloque os soros controles no poços. Adicionar 1 gota (20-25mL) de amostras de pacientes diluídas nos poços numerados.
3.Incubação das lâminas (30±5 minutos a temperatura ambiente – 18 a 24o C):
Coloque a(s) lâmina(s) em uma câmara úmida coberta.
4.Enxágüe com Tampão :
Remova a(s) lâmina(s) da incubadora e lave brevemente com PBS usando uma piseta ou Pipeta Pasteur .
5.Lavagem Com o PBS:
Lave a(s) lâmina(s) por 10 minutos com o Tampão PBS na Jarra Coplin ou cuba de lavagem.
6.Reagente de Anticorpo Fluorescente (Cubra os poços com 10-12 gotas):
Remova uma lâmina de cada vez do tampão e mergulhe de 3-5 vezes na água destilada ou deionizada. Bate-los de lado contra papéis absorventes para remover o excesso de água. Retorne imediatamente a lâmina à câmara de incubação e cubra os poços completamente usando o Reagente de Anticorpo Fluorescente. Repita o procedimento para cada lâmina.
7.Incubação das lâminas (30±5 minutos a temperatura ambiente – 18 a 24o C):
Coloque a(s) lâmina(s) em uma câmara úmida coberta (uma placa de Petri com papel toalha molhado já será adequado).
8.Enxágüe com Tampão :
Remova a(s) lâmina(s) da incubadora e lave brevemente com PBS usando uma piseta ou Pipeta Pasteur .
9.Lavagem Com o PBS:
Lave a(s) lâmina(s) por 10 minutos com o Tampão PBS na Jarra Coplin ou cuba de lavagem.
10.Montagem das Lamínulas:
Remova uma lâmina de cada vez do tampão e mergulhe de 3-5 vezes na água destilada ou deionizada. Bate-los de lado contra papéis absorventes para remover o excesso de água.
Adicionar 4-5 gotas de Meio de Montagem Semipermanente ao longo da linha média de cada lâmina. Coloque cuidadosamente a lamínula na posição, evitando bolhas de ar, através do abaixamento da lamínula de uma extremidade da lâmina para outra.

País: ESTADOS UNIDOS