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ADENOVÍRUS - R-BIOPHARM



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Descrição:
Para o diagnóstico in vitro. O RIDASCREEN® Adenovírus é um ensaio imunoenzimático para a determinação qualitativa de antígenos adenovírus em amostras de fezes ou para a confirmação de adenovírus que foram cultivados em culturas celulares.

Apresentação:96

Metodologia: ELISA

Grupo: PARASITOLOGIA

Categoria: VIRUS - PESQUISA DE ANTIGENOS

Registro no MS: 80213250071

Os adenovírus se caracterizam por uma formação típica icosaédrica com estruturas de antígeno na superfície. São conhecidos mais de 50 tipos de vírus que podem causar infecções no olho, no aparelho respiratório ou no trato intestinal. As infecções do trato intestinal são particularmente causadas pelo tipo 40/41. Porém, eles também podem aparecer em infecções com outros tipos de enterites como sintomas colaterais.

Os adenovírus são, após os rotavírus, juntamente com os astrovírus a segunda causa mais comum de doenças intestinais em crianças. Mas eles também atacam os adultos. Uma vez que uma gastroenterite causada por adenovírus clinicamente não se diferencia de uma gastroenterite causada por rotavírus ou astrovírus, deve-se examinar a presença de todos os três agentes patogênicos nos pacientes.

O anticorpos monoclonais utilizados no RIDASCREEN® Adenovirus são caracterizados contra a proteína hexon, específica do adenovírus, e abrangem, com isso, tanto os tipos enteral 40/41, bem como a maior parte dos outros tipos, que são responsáveis pela infecção no olho ou no aparelho respiratório.

Referência:

Amostras acima de 10% do cut-off calculado são consideradas positivas.

Amostras com absorbância entre ± 10% do cut-off são consideradas indeterminadas e devem ser repetidas.

Amostras abaixo de 10% do cutoff calculado devem ser consideradas negativas.

 

Procedimentos:
Preparo do tampão de lavagem:
Uma parte do tampão de lavagem concentrado (Wash) deve ser misturado com 9 partes de água destilada. Eventuais cristais presentes no tampão concentrado devem ser dissolvidos
anteriormente em banho-maria a 37°C.
Preparo das amostras:
Em um tubo, é colocado 1 mL de tampão de diluição de amostra (Diluent 1). As fezes líquidas são absorvidas em uma pipeta descartável até pouco antes da segunda marca (aprox. 100μl) e suspensas no tampão diluente de amostra. No caso de fezes sólidas, uma quantidade equivalente de fezes (aprox. 50 - 100mg) é retirada com uma espátula ou uma alça e suspensa na solução. A homogeneização da suspensão de fezes é feita através da pipeta descartável porsucções e ejeções ou alternativamente através da mistura em um agitador vortex. Após um curto período de repouso para a sedimentação de partículas maiores de fezes, o sobrenadante clareado pode ser utilizado diretamente no teste. Se o teste for realizado em equipamento para ELISA, este sobrenadante deve ser livre de partículas. Neste caso, recomenda-se uma centrifugação a 5.000 rpm (aprox. 2.300 – 2.500 g) por 5 minutos.
Primeira incubação
Depois de selecionar o número suficiente de cavidades na microplaca, pipetar 2 gotas (100μl) do controle positivo, do tampão de diluição das amostras ou da suspensão das amostras de fezes. Adicionar 2 gotas (100 μl) do anticorpo conjugado à biotina e após a mistura total (bater ligeiramente a placa), incubar por 60 minutos à temperatura ambiente (20 – 25 °C).
Lavagem
Após a incubação, o conteúdo liquido das cavidades deve ser esvaziado em um recipiente de com solução de hipoclorito para a desinfecção. Então, lava-se 5 vezes, cada vez com 300μl de tampão de lavagem. Depois inverta a placa em papel absorvente para retirar resíduos de solução lavagem dos poços. Com isso, deve fazer um esvaziamento completo após cada lavagem, batendo em papel absorvente.
Com a utilização de uma lavadora automática, observar o ajuste correto do equipamento com relação ao tipo de placa utilizado. Além disso, uma suspensão de fezes não completamente livre de partículas deve ser retirada manualmente das cavidades antes da primeira lavagem através da centrifugação, para evitar o entupimento das agulhas
de lavagem. Durante cada fase da lavagem, deve-se observar uma completa remoção dos líquidos. Após a última lavagem, a placa deve ser batida em papel
absorvente e limpo ou em lenços de laboratório, para retirar a umidade restante. Para alcançar um resultado ideal de lavagem, recomenda-se a lavagem no modo overflow com pelo menos 600 μL de tampão de lavagem por cavidade e por etapa de lavagem.
Pode ser realizado um número de lavagens superior a 5, e isto pode ocasionalmente levar a melhores resultados de lavagem.
Segunda incubação
Pipetar 2 gotas (100μl) do conjugado poli-streptavidinaperoxidase (Conjugate 2) são inseridas em todas as cavidades. Depois a placa é incubada por 30 minutos a temperatura ambiente (20 –25 °C).
Lavagem:
Lavar conforme descrito acima.
Terceira Incubação:
Adicionar 2 gotas ou 100μl de substrato (Substrate) em todas as cavidades. Após a adição, a placa é incubada por 15 minutos em temperatura ambiente (20-25ºC) no escuro. Depois, a reação é bloqueada com a adição de 1 gota (50μl) de reagente bloqueador (Stop) em todas as cavidades. Após a cuidadosa homogeneização (batida suave na beira da placa) a absorbância é medida a 450 nm.

País: ALEMANHA