HEp 2000®

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Desafios na Detecção e Diagnóstico de Doenças Reumáticas Sistêmicas

Doenças autoimunes são caracterizadas fundamentalmente pela formação de auto anticorpos contra os próprios tecidos do organismo. Por mecanismos desconhecidos, o sistema imunológico que normalmente deveria proteger, passa a produzir anticorpos contra suas próprias células normais. Portanto o que caracteriza a doença auto imune é a formação de anticorpos contra seus próprios constituintes. Podemos dizer que a pessoa se torna ‘alérgica” a ela mesma.

Doenças auto imunes não são contagiosas, infecciosas ou malignas. Os sintomas variam grandemente, de pessoa a pessoa, muitas delas ocorrem esporadicamente e sabe-se que fatores genéticos e ambientais tem um papel muito importante no desencadeamento e evolução da doença.

Os sintomas do Lupus Eritematoso Sistêmico (LES), variam enormemente de um paciente a outro, de casos simples que exigem intervenções clínicas mínimas a casos graves que afetam com danos órgãos vitais como cérebro, coração, rins e pulmões. Ela é caracterizada por períodos de atividade intensa, intercalados por períodos de remissão que podem durar de semanas a anos. Pacientes acometidos de LES podem muitas vezes levar uma vida normal desde que tratadas adequadamente. O não tratamento culmina com complicações graves da pele, articulações, fígado, coração, pulmão ou no cérebro muitas vezes incompatíveis com a vida. É uma doença rara que atingem as mulheres na faixa de 13 a 40 anos. Os principais fatores desencadeantes do LES são genéticos, hormonais, stress, luz ultravioleta, vírus e medicamentos diversos.

O diagnóstico do LES é feito a partir do histórico do paciente associados aos exames clínicos e laboratoriais. O Colégio Americano de Patologistas, estabeleceu em 1971 e depois modificados em 1997 onze critérios divididos em 3 grupos para definir a possibilidade de uma pessoa estar acometida por LES. São 4 critérios relacionados a pele; 4 critérios sistêmicos e três laboratoriais. Portanto o teste de FAN, utilizando células epitelióides humanas como substrato em técnicas de IFI é apenas um dos onze critérios de definição da doença.

Outra importante doença auto imune é a Síndrome de Sjogren (SS). Esta doença auto imune crônica basicamente ocorre devido ao fato de haver uma infiltração celular mista nas glândulas exócrinas, mais notadamente nas glândulas lacrimais e salivares do qual tem como conseqüência a diminuição na produção de lágrimas e saliva. Outros órgãos como rins pulmões, vasos sanguíneos, fígado, cérebro e coração podem ser acometidos. Fadiga e dor podem comprometer de forma significativa a qualidade de vida do paciente. A SS acomete predominantemente as mulheres, indicando que fatores hormonais podem estar presentes.

Os sintomas da doença são muito variados podendo ser bastante diferente de uma pessoa a outra. Para alguns, secura nos olhos e na boca são manifestações claras. Outras manifestações podem ser uma sensibilidade a luz, úlceras na boca, fadiga sem causa aparente ,etc.

Outras doenças autoimunes de origem reumática podem ou não estar associadas com a LES ou SS. São Doença mista do tecido conectivo (DMTC), miosites, dermatomiosites, etc.

Diagnóstico Laboratorial:

Um dos mais importantes métodos diagnósticos para doenças autoimunes é o teste denominado Fator Anti Nuclear (FAN) utilizando como substrato células Epitelióides Humanas (HEp-2). Atualmente, tem sido empregados com freqüência cada vez maior células geneticamente modificadas, transfectadas com o antígeno SS-A/Ro. Este novo substrato comercialmente denominado Fluorescent ANA-Ro HEp-2000â fabricado por Immuno Concepts –EUA é distribuído no Brasil exclusivamente pela Alka.

HEp-2000® ANA, utiliza uma linhagem celular HEp-2 geneticamente modificada, transfectadas com o cDna SS-A/Ro 60 kD para um aumento da sensibilidade na detecção de autoanticorpos SS-A/Ro sem afetar a visualização e caracterização dos padrões de outros anticorpos normalmente visualizados em células HEp-2. Inúmeros trabalhos científicos independentes tem sido publicados mundialmente a respeito do substrato HEp-2000® que comprovam o aumento da sensibilidade para anticorpos SS-A/Ro quando utilizados no lugar de células HEp-2 convencionais em rotinas de pesquisa de ANA. Sabemos que as células HEp-2 convencionais não possuem sensibilidade suficiente para detectar estes anticorpos e que muitas vezes pacientes tem sido diagnosticados erroneamente com resultado falso negativo justamente devido a baixa sensibilidade específica. Outro fato que merece atenção é o Lupus neonatal em crianças da qual mães com LES assintomáticas possuem autoanticorpos anti SS-A/Ro e/ou SS-B/La. Estas mulheres grávidas, assintomáticas quando submetidas a testes de Fan por HEp-2 convencionais também podem ter resultado falso negativo. Daí a grande vantagem em utilizar o HEp-2000®, pois devido a transfecção celular temos uma sensibilidade melhorada e com isto uma chance a mais para o diagnóstico precoce. Embora existam controvérsias quanto a freqüência do Lupus neonatal estudos tem demonstrado a clara correlação dos anticorpos anti SS-A/Ro presentes na mãe com o aumento do risco da s manifestações do lupus neo natal.

Principais benefícios:

· Células HEp-2 geneticamente modificadas que hiperexpressam o antígeno nativo SS-A/Ro 60 kD.
· Amostras SS-A/Ro positivas são diferenciadas pela visualização de um padrão de reação único;
· O aumento da concentração do antígeno SS-A/Ro melhora a sensibilidade na detecção de anticorpos específicos anti SS-A/Ro;
· Anticorpos anti SS-A/Ro são considerados confirmatórios quando o padrão de hiperexpressão típico é visualizado;
· A transfecção não afeta a visualização dos demais padrões comumente encontrados nas células HEp-2 convencionais.
· Único kit com 5 controles positivos e um negativo, além de um soro controle titulável independente. Este controle está em conformidade com a WHO.

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